Kea leboha ha le etetse Nature.com. Mofuta wa sebatli seo o se sebedisang o na le tshehetso e fokolang bakeng sa CSS. Bakeng sa boiphihlelo bo botle ka ho fetisisa, re kgothaletsa hore o sebedise sebatli se ntjhafaditsweng (kapa o tima mokgwa wa ho tsamaisana le Internet Explorer). Ho sa le jwalo, ho netefatsa tshehetso e tswelang pele, re tla bontsha sebaka sena sa marang-rang ntle le mekgwa le JavaScript.
Li-nanoparticles tsa insulin (NPs) tse nang le tekanyo e phahameng ea ho jara li fumane lits'ebetso tse fapaneng ka mefuta e fapaneng ea litekanyetso. Mosebetsi ona o ikemiselitse ho lekola phello ea lits'ebetso tsa ho omisa ka serame le ho fafatsa ka spray sebopehong sa li-nanoparticles tsa chitosan tse nang le insulin, tse nang le kapa tse se nang mannitol e le cryoprotectant. Re boetse ra lekola boleng ba li-nanoparticles tsena ka ho li qhaqha bocha. Pele ho ho felloa ke metsi, boholo ba likaroloana tsa chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin cross-linked nanoparticles bo ile ba ntlafatsoa ho ba 318 nm, PDI e ne e le 0.18, katleho ea encapsulation e ne e le 99.4%, 'me mojaro e ne e le 25.01%. Kamora ho hlophisoa bocha, li-nanoparticles tsohle, ntle le tse hlahisoang ke mokhoa oa ho omisa ka serame ntle le tšebeliso ea mannitol, li ile tsa boloka sebopeho sa tsona sa chipalesa se chitja. Ha li bapisoa le li-nanoparticles tse nang le mannitol tse felloang ke metsi ka spray, li-nanoparticles tse omisitsoeng ka spray tse se nang mannitol le tsona li bontšitse boholo bo bonyenyane ba karolelano ea likaroloana (376 nm) le boholo bo phahameng ka ho fetisisa ba mojaro (25.02%). ka sekhahla se tšoanang sa ho koalla (98.7%) le PDI (0.20) ka mekhoa ea ho omisa kapa ho omisa ka serame. Li-nanoparticles tse omisitsoeng ka ho omisa ka spray ntle le mannitol le tsona li bakile tokollo e potlakileng ea insulin le katleho e phahameng ka ho fetisisa ea ho monya ha sele. Mosebetsi ona o bontša hore ho omisa ka spray ho ka ntša metsi li-nanoparticles tsa insulin ntle le tlhoko ea li-cryoprotectants ha li bapisoa le mekhoa e tloaelehileng ea ho omisa ka serame, e leng se etsang hore ho be le bokhoni bo boholo ba ho kenya, ho be le litlhoko tse tlase tsa tlatsetso le litšenyehelo tsa ts'ebetso.
Ho tloha ha e sibolloa ka 1922, 2, 3, insulin le dihlahiswa tsa yona tsa meriana di pholositse maphelo a bakudi ba nang le lefu la tswekere la mofuta wa 1 (T1DM) le lefu la tswekere la mofuta wa 2 (T1DM). Leha ho le jwalo, ka lebaka la thepa ya yona e le protheine e boima ba dimolek'hule, insulin e kopanngwa habonolo, e arolwa ke dienzyme tsa proteolytic, mme e fediswa ke phello ya pele ya ho feta. Batho ba fumanweng ba na le lefu la tswekere la mofuta wa 1 ba hloka diente tsa insulin bophelo bohle ba bona. Bakudi ba bangata ba qadileng ba fumanwa ba na le lefu la tswekere la mofuta wa 2 le bona ba hloka diente tsa insulin tsa nako e telele. Diente tsa insulin tsa letsatsi le letsatsi ke mohlodi o moholo wa bohloko le ho se phutholohe letsatsi le letsatsi ho batho bana, ka ditlamorao tse mpe bophelong ba kelello. Ka lebaka leo, mefuta e meng ya tsamaiso ya insulin e bakang ho se phutholohe ho fokolang, jwalo ka tsamaiso ya insulin ya molomo, e ntse e ithutwa ka botlalo5 kaha e na le bokgoni ba ho tsosolosa boleng ba bophelo ba batho ba ka bang dibilione tse 5 ba nang le lefu la tswekere lefatsheng ka bophara.
Theknoloji ea Nanoparticle e fane ka tsoelo-pele e kholo boitekong ba ho nka insulin ea molomo4,6,7. E 'ngoe e koahelang le ho sireletsa insulin hore e se ke ea senyeha bakeng sa ho isoa libakeng tse itseng tsa' mele. Leha ho le joalo, tšebeliso ea mekhoa ea nanoparticle e na le meeli e 'maloa, haholo-holo ka lebaka la mathata a botsitso ba ho emisoa ha likaroloana. Ho kopana ho itseng ho ka etsahala nakong ea polokelo, e leng se fokotsang ho fumaneha ha nanoparticles tse nang le insulin8. Ho phaella moo, botsitso ba lik'hemik'hale ba matrix ea polymer ea nanoparticles le insulin le bona bo tlameha ho nahanoa ho netefatsa botsitso ba nanoparticles tsa insulin (NPs). Hona joale, theknoloji ea ho omisa ka serame ke tekanyetso ea khauta ea ho theha NPs tse tsitsitseng ha ho ntse ho thibeloa liphetoho tse sa batleheng nakong ea polokelo9.
Leha ho le jwalo, ho omisa ka serame ho hloka ho eketsoa ha di-cryoprotectants ho thibela sebopeho sa chitja sa NPs ho angwa ke kgatello ya mechine ya dikristale tsa leqhoa. Sena se fokotsa haholo mojaro wa di-nanoparticles tsa insulin kamora lyophilization, kaha cryoprotectant e nka boholo ba karolelano ya boima. Ka hona, di-insulin NP tse hlahisitsweng hangata di fumanwa di sa lokele ho etswa ha di-formulations tsa phofo e omileng, jwalo ka matlapa a nowang le difilimi tsa molomo, ka lebaka la tlhoko ya di-nanoparticles tse ngata tse omileng ho fihlella fensetere ya kalafo ya insulin.
Ho omisa ka spray ke mokhoa o tsebahalang haholo le o theko e tlase oa indasteri bakeng sa ho hlahisa phofo e omileng ho tsoa mekhahlelong ea metsi indastering ea meriana10,11. Taolo ea ts'ebetso ea ho theha likaroloana e lumella ho kenngoa hantle ha metsoako e 'maloa e sebetsang 12, 13. Ho feta moo, e se e le mokhoa o atlehang oa ho lokisa liprotheine tse kentsoeng bakeng sa ho nooa ka molomo. Nakong ea ho omisa ka spray, metsi a fetoha mouoane ka potlako haholo, e leng se thusang ho boloka mocheso oa karolo e ka tlase11,14, e leng se nolofalletsang ts'ebeliso ea ona ho kenya likarolo tse amehang mochesong. Pele ho omisa ka spray, thepa ea ho roala e lokela ho hokahanngoa hantle ka tharollo e nang le metsoako e kentsoeng11,14. Ho fapana le ho omisa ka serame, ho hokahanngoa pele ho kenngoa ka spray ho ntlafatsa katleho ea ho kenngoa ka spray nakong ea ho felloa ke metsi. Kaha ts'ebetso ea ho kenya ka spray ka spray ha e hloke li-cryoprotective, ho omisa ka spray ho ka sebelisoa ho hlahisa li-NP tse omisitsoeng tse nang le litaba tse ngata tsa ho kenya.
Phuputso ena e tlaleha tlhahiso ea li-NP tse nang le insulin ka ho kopanya chitosan le sodium tripolyphosphate ho sebelisa mokhoa oa ion gel. Ion gelation ke mokhoa oa ho lokisa o lumellang tlhahiso ea li-nanoparticles ka likamano tsa electrostatic pakeng tsa mefuta e 'meli kapa ho feta ea ionic tlas'a maemo a itseng. Mekhoa ea ho omisa ka ho hatsetsa le ho fafatsa e sebelisitsoe ho ntša metsi li-nanoparticles tse kopantsoeng le chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin tse ntlafalitsoeng. Kamora ho felloa ke metsi, sebopeho sa tsona se ile sa hlahlojoa ke SEM. Bokhoni ba tsona ba ho kopanya hape bo ile ba hlahlojoa ka ho lekanya kabo ea boholo ba tsona, tefiso ea bokaholimo, PDI, katleho ea ho kenya, le litaba tsa ho kenya. Boleng ba li-nanoparticles tse qhibilihisitsoeng tse hlahisitsoeng ke mekhoa e fapaneng ea ho felloa ke metsi bo ile ba hlahlojoa ka ho bapisa tšireletso ea tsona ea insulin, boitšoaro ba ho lokolloa, le katleho ea ho monya lisele.
PH ea tharollo e tsoakiloeng le karolelano ea chitosan le insulin ke lintlha tse peli tsa bohlokoa tse amang boholo ba likaroloana le katleho ea encapsulation (EE) ea li-NP tsa ho qetela, kaha li ama ka kotloloho ts'ebetso ea gelation ea ionotropic. PH ea tharollo e tsoakiloeng e bontšitsoe e amana haholo le boholo ba likaroloana le katleho ea encapsulation (Setšoantšo sa 1a). Joalokaha ho bontšitsoe ho Setšoantšo sa 1a, ha pH e ntse e eketseha ho tloha ho 4.0 ho isa ho 6.0, boholo ba karolelano ea likaroloana (nm) bo ile ba fokotseha 'me EE ea eketseha haholo, ha pH e ntse e eketseha ho ea ho 6.5, boholo ba karolelano ea likaroloana bo ile ba qala ho eketseha 'me EE ea lula e sa fetohe. Ha karolelano ea chitosan ho insulin e ntse e eketseha, boholo ba karolelano ea likaroloana le bona boa eketseha. Ho feta moo, ha ho phetoho ho EE e ileng ea bonoa ha li-nanoparticles li ne li lokisoa ka karolelano ea boima ba chitosan/insulin e phahameng ho feta 2.5:1 (w/w) (Setšoantšo sa 1b). Ka hona, maemo a ho itokisa a matle thutong ena (pH 6.0, karolelano ea boima ba chitosan/insulin ea 2.5:1) a ile a sebelisoa ho lokisa di-nanoparticles tse jereng insulin bakeng sa thuto e eketsehileng. Tlas'a boemo bona ba ho itokisa, boholo ba karolelano ba dikarolwana tsa di-nanoparticles tsa insulin bo ntlafaditswe ho ba 318 nm (Setshwantsho sa 1c), PDI e ne e le 0.18, bokgoni ba ho kenya e ne e le 99.4%, bokgoni ba zeta e ne e le 9.8 mv, mme mojaro wa insulin e ne e le 25.01% (m/m ). Ho latela diphetho tsa transmission electron microscopy (TEM), di-nanoparticles tse ntlafaditsweng di ne di batla di le chitja ebile di arohane ka boholo bo lekanang (Setshwantsho sa 1d).
Ntlafatso ea liparamente tsa li-nanoparticles tsa insulin: (a) phello ea pH holim'a bophara bo tloaelehileng le katleho ea encapsulation (EE) ea li-nanoparticles tsa insulin (e lokisitsoeng ka karolelano ea boima ba 5:1 ea chitosan le insulin); (b) chitosan le Tšusumetso ea karolelano ea boima ba insulin holim'a bophara bo tloaelehileng le katleho ea encapsulation (EE) ea li-NPs tsa insulin (e lokisitsoeng ho pH 6); (c) kabo ea boholo ba likaroloana tsa li-nanoparticles tsa insulin tse ntlafalitsoeng; (d) Micrograph ea TEM ea li-NPs tsa insulin tse ntlafalitsoeng.
Ho tsebahala hantle hore chitosan ke polyelectrolyte e fokolang e nang le pKa ea 6.5. E chajiloe hantle ka har'a media ea asiti hobane sehlopha sa eona se seholo sa amino se na le proton ke li-ion tsa hydrogen15. Ka hona, hangata e sebelisoa e le mojari ho koahela li-macromolecule tse chajiloeng hampe. Phuputsong ena, chitosan e sebelisitsoe ho koahela insulin ka ntlha ea isoelectric ea 5.3. Kaha chitosan e sebelisoa e le thepa ea ho koahela, ka keketseho ea karolo ea eona, botenya ba lera le ka ntle la li-nanoparticles boa eketseha ka ho lekana, e leng se fellang ka boholo bo boholo ba karolelano ea likaroloana. Ho phaella moo, maemo a holimo a chitosan a ka koahela insulin e ngata. Tabeng ea rona, EE e ne e le holimo haholo ha karolelano ea chitosan le insulin e fihla ho 2.5:1, 'me ho ne ho se na phetoho e kholo ho EE ha karolelano e ntse e eketseha.
Ntle le karolelano ea chitosan le insulin, pH e boetse e bapetse karolo ea bohlokoa ho lokiseng NPs.Gan et al. 17 ba ithutile phello ea pH boholong ba likaroloana tsa chitosan nanoparticles. Ba fumane phokotso e tsoelang pele ea boholo ba likaroloana ho fihlela pH e fihla ho 6.0, 'me keketseho e kholo ea boholo ba likaroloana e ile ea bonoa ho pH > 6.0, e leng se lumellanang le seo re se boneng. Ketsahalo ena e bakoa ke taba ea hore ka pH e ntseng e eketseha, molek'hule ea insulin e fumana tjhaja e mpe ea bokaholimo, ka hona, e rata likamano tsa electrostatic le chitosan/sodium tripolyphosphate (TPP) complex, e leng se fellang ka boholo ba likaroloana tse nyane le EE e phahameng. Leha ho le joalo, ha pH e fetoloa ho 6.5, lihlopha tsa amino ho chitosan li ile tsa tlosoa proton, e leng se fellang ka ho mena ha chitosan. Ka hona, pH e phahameng e fella ka ho pepesehela li-ion tsa amino ho TPP le insulin hanyane, e leng se fellang ka ho fokotsa ho hokahanya, boholo ba karolelano bo boholo ba ho qetela le EE e tlase.
Tlhahlobo ea litšobotsi tsa sebopeho sa li-NP tse omisitsoeng ka ho hatsetsa le tse omisitsoeng ka ho fafatsa e ka tataisa khetho ea mekhoa e betere ea ho felloa ke metsi le ho etsa phofo. Mokhoa o khethiloeng o lokela ho fana ka botsitso ba moriana, sebopeho se ts'oanang sa likaroloana, ho jara moriana o mongata le ho qhibiliha hantle tharollong ea pele. Thutong ena, ho bapisa mekhoa ena e 'meli hamolemo, li-NP tsa insulin tse nang le 1% mannitol kapa tse se nang eona li ile tsa sebelisoa nakong ea ho felloa ke metsi. Mannitol e sebelisoa e le sesebelisoa sa ho bokella kapa ho sireletsa cryoprotectant mefuteng e fapaneng ea phofo e omileng bakeng sa ho omisa ka ho hatsetsa le ho omisa ka spray. Bakeng sa li-nanoparticles tsa insulin tse nang le lyophilized ntle le mannitol, joalo ka ha ho bontšitsoe ho Setšoantšo sa 2a, sebopeho sa phofo se nang le masoba a mangata se nang le libaka tse kholo, tse sa tloaelehang le tse makukuno se ile sa bonoa tlas'a scanning electron microscopy (SEM). Ho ile ha fumanoa likaroloana tse fokolang ka har'a phofo kamora ho felloa ke metsi (Setšoantšo sa 2e). Liphetho tsena li bontšitse hore li-NP tse ngata li ile tsa bola nakong ea ho omisa ka ho hatsetsa ntle le cryoprotectant efe kapa efe. Bakeng sa li-nanoparticles tsa insulin tse omisitsoeng ka ho hatsetsa le tse omisitsoeng ka spray tse nang le 1% mannitol, li-nanoparticles tse chitja tse nang le libaka tse boreleli li ile tsa bonoa (Setšoantšo sa 1). 2b,d,f,h).Likaroloana tsa insulin tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol li ile tsa lula li le chitja empa li sosobane holim'a metsi (Setšoantšo sa 2c). Libaka tse chitja le tse sosobaneng li tšohloa haholoanyane boitšoarong ba ho lokolloa le litekong tsa ho monya lisele ka tlase. Ho latela ponahalo e bonahalang ea li-NP tse omisitsoeng, li-NP tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol le NPs li ile tsa hatsetsoa ka ho omisoa le ho omisoa ka spray ka mannitol li hlahisitse phofo e ntle ea NPs (Setšoantšo sa 2f,g,h). Ha sebaka se seholo pakeng tsa libaka tsa likaroloana se le seholo, ho qhibiliha hoa phahama 'me ka hona sekhahla sa ho lokolloa sea phahama.
Sebopeho sa li-NP tse fapaneng tsa insulin tse omeletseng: (a) Setšoantšo sa SEM sa li-NP tsa insulin tse nang le lyophilized ntle le mannitol; (b) Setšoantšo sa SEM sa li-NP tsa insulin tse nang le lyophilized tse nang le mannitol; (c) li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol Setšoantšo sa SEM sa ; (d) Setšoantšo sa SEM sa li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka spray ka mannitol; (e) setšoantšo sa phofo ea li-NP tsa insulin tse nang le lyophilized ntle le mannitol; (f) setšoantšo sa li-NP tsa insulin tse nang le lyophilized tse nang le mannitol; (g) Setšoantšo sa phofo ea li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol; (h) setšoantšo sa phofo ea li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka spray tse nang le mannitol.
Nakong ea ho omisa ka serame, mannitol e sebetsa e le sesebelisoa sa ho sireletsa mahlo, e boloka li-NP ka mokhoa o sa fetoheng le ho thibela tšenyo ea likristale tsa leqhoa19. Ka lehlakoreng le leng, ha ho na mohato oa ho hoamisa nakong ea ho omisa ka spray. Ka hona, mannitol ha e hlokahale ka mokhoa ona. Ha e le hantle, li-NP tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol li hlahisitse li-NP tse ntle joalo ka ha ho hlalositsoe pele. Leha ho le joalo, mannitol e ntse e ka sebetsa e le tlatsetso ts'ebetsong ea ho omisa ka spray ho fa li-NP sebopeho se chitja20 (Setšoantšo sa 2d), se thusang ho fumana boitšoaro bo tšoanang ba tokollo ea li-NP tse joalo tse kentsoeng. Ho phaella moo, ho hlakile hore likaroloana tse ling tse kholo li ka bonoa ho li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka serame le tse omisitsoeng ka spray tse nang le mannitol (Setšoantšo sa 2b, d), e ka bang ka lebaka la ho bokellana ha mannitol ka har'a karoloana ea mantlha hammoho le insulin e kentsoeng. Ho.Lera la Chitosan. Hoa hlokomeleha hore thutong ena, e le ho netefatsa hore sebopeho se chitja se lula se sa senyeha kamora ho felloa ke metsi 'meleng, karolelano ea mannitol le chitosan e bolokoa ho 5:1, e le hore palo e kholo ea se tlatsang e ka boela ea eketsa boholo ba likaroloana tsa NP tse omisitsoeng.
Spectroscopy ea Fourier transform infrared attenuated total reflection (FTIR-ATR) e ne e khetholla motsoako oa 'mele oa insulin e lokolohileng, chitosan, chitosan, TPP le insulin. Li-NP tsohle tse se nang metsi li ne li khetholloa ka ho sebelisa spectroscopy ea FTIR-ATR. Haholo-holo, matla a sehlopha sa 1641, 1543 le 1412 cm-1 a ile a bonoa ho li-NP tse kentsoeng ka har'a capsule tse omisitsoeng ka mannitol le ho li-NP tse omisitsoeng ka spray ka mannitol le ntle le eona (Setšoantšo sa 3). Joalokaha ho tlalehiloe pele, keketseho ena ea matla e ne e amahanngoa le ho hokahanya pakeng tsa chitosan, TPP le insulin. Phuputso ea tšebelisano-'moho pakeng tsa chitosan le insulin e bontšitse hore ho li-spectra tsa FTIR tsa li-nanoparticles tsa chitosan tse nang le insulin, sehlopha sa chitosan se ne se tšoana le sa insulin, se eketsa matla a carbonyl (1641 cm-1) le lebanta la amine (1543 cm-1). Lihlopha tsa tripolyphosphate tsa TPP li hokahane le lihlopha tsa ammonium ho chitosan, li theha lebanta le bolelele ba 1412 cm-1.
Li-spectra tsa FTIR-ATR tsa insulin e sa lefelloeng, chitosan, metsoako ea 'mele ea chitosan/TPP/insulin le NPs tse ntšoang metsi ka mekhoa e fapaneng.
Ho feta moo, diphetho tsena di tsamaellana le tse bontshitsweng ho SEM, tse bontshitseng hore di-NP tse kentsweng ka hare di ile tsa dula di sa senyeha ha di fafatswa le ha di omiswa ka mannitol, empa ha ho se na mannitol, ke ho fafatsa feela ho hlahisang dikarolwana tse kentsweng ka hare. Ka lehlakoreng le leng, diphetho tsa spectral tsa FTIR-ATR tsa di-NP tse kentsweng ka hare ho mannitol di ne di tshwana haholo le motswako wa mmele wa chitosan, TPP, le insulin. Sephetho sena se bontsha hore dihokelo tse pakeng tsa chitosan, TPP le insulin ha di sa le teng ho di-NP tse kentsweng ka hare ho mannitol. Sebopeho sa di-NP se ile sa senngwa nakong ya ho fafatsa ntle le cryoprotectant, e leng se ka bonwang diphethong tsa SEM (Setshwantsho sa 2a). Ho itshetlehile ka sebopeho le diphetho tsa FTIR tsa di-NP tsa insulin tse ommeng, di-NP tse kentsweng ka hare ho lyophilized, tse kentsweng ka hare ho mannitol di ile tsa sebediswa bakeng sa diteko tsa ho tsosolosa le di-NP tse se nang mannitol ka lebaka la ho bola ha di-NP tse se nang mannitol nakong ya ho fellwa ke metsi. buisana.
Ho felloa ke metsi 'meleng ho sebelisoa bakeng sa polokelo ea nako e telele le ho e sebelisa hape ho etsa mefuta e meng. Bokhoni ba li-NP tse omileng ba ho li kopanya hape ka mor'a polokelo bo bohlokoa bakeng sa tšebeliso ea tsona mefuteng e fapaneng joalo ka matlapa le lifilimi. Re hlokometse hore boholo ba karolelano ea likaroloana tsa li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka spray ha ho se na mannitol bo eketsehile hanyane feela ka mor'a ho li kopanya hape. Ka lehlakoreng le leng, boholo ba likaroloana tsa li-nanoparticles tsa insulin tse omisitsoeng ka spray le tse hatselitsoeng ka ho hatsetsoa tse nang le mannitol bo eketsehile haholo (Tafole ea 1). PDI le EE ha lia ka tsa fetoloa haholo (p > 0.05) kamora ho kopanya hape li-NP tsohle thutong ena (Tafole ea 1). Sephetho sena se bontša hore boholo ba likaroloana li ile tsa lula li sa senyeha ka mor'a ho qhibiliha hape. Leha ho le joalo, ho eketsoa ha mannitol ho ile ha fella ka ho fokotseha haholo ha insulin e jara li-nanoparticles tsa lyophilized le tse omisitsoeng ka spray (Tafole ea 1). Ka lehlakoreng le leng, tekanyo ea insulin ea li-NP tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol e ile ea lula e tšoana le pele (Tafole ea 1).
Ho tsebahala hantle hore ho jarisoa ha nanoparticles ho bohlokoa ha ho sebelisoa bakeng sa merero ea ho fana ka meriana. Bakeng sa li-NP tse nang le meroalo e tlase, ho hlokahala lintho tse ngata haholo ho fihlela moeli oa phekolo. Leha ho le joalo, viscosity e phahameng ea mahloriso a phahameng a NP e lebisa ho tšitiso le bothata ba ho nooa le ho kenngoa ka ente, ka ho latellana 22. Ho phaella moo, li-insulin NP li ka boela tsa sebelisoa ho etsa matlapa le li-biofilms tse viscous23, 24, tse hlokang tšebeliso ea li-NP tse ngata maemong a tlase a ho jarisoa, e leng se fellang ka matlapa a maholo le li-biofilms tse teteaneng tse sa lokelang ho sebelisoa ka molomo. Ka hona, li-NP tse omeletseng tse nang le mojaro o phahameng oa insulin li lakatseha haholo. Liphetho tsa rona li bontša hore mojaro o phahameng oa insulin oa li-NP tse omisitsoeng tse se nang mannitol o ka fana ka melemo e mengata e khahlang bakeng sa mekhoa ena e meng ea ho fana.
Li-NP tsohle tse se nang metsi li ile tsa bolokoa ka sehatsetsing ka likhoeli tse tharo. Liphetho tsa SEM li bontšitse hore sebopeho sa li-NP tsohle tse se nang metsi ha sea ka sa fetoha haholo nakong ea polokelo ea likhoeli tse tharo (Setšoantšo sa 4). Kamora ho hlophisoa bocha ka metsing, li-NP tsohle li bontšitse phokotso e nyane ho EE 'me tsa lokolla hoo e ka bang karolo e nyane (~5%) ea insulin nakong ea polokelo ea likhoeli tse tharo (Tafole ea 2). Leha ho le joalo, boholo ba karolelano ea likaroloana tsa nanoparticles tsohle bo ile ba eketseha. Boholo ba likaroloana tsa li-NP tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol bo ile ba eketseha ho fihlela ho 525 nm, ha ba li-NP tse omisitsoeng ka spray le tse omisitsoeng ka hoamisoa ka mannitol bo ile ba eketseha ho fihlela ho 872 le 921 nm, ka ho latellana (Tafole ea 2).
Sebopeho sa li-NP tse fapaneng tsa insulin tse omeletseng tse bolokiloeng likhoeli tse tharo: (a) Setšoantšo sa SEM sa li-NP tsa insulin tse nang le lyophilized tse nang le mannitol; (b) Setšoantšo sa SEM sa li-nanoparticles tsa insulin tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol; (c) ntle le mannitol litšoantšo tsa SEM tsa li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka spray.
Ho feta moo, ho ile ha bonoa marotholi a metsi ka har'a li-nanoparticles tsa insulin tse nchafalitsoeng tse omisitsoeng ka mannitol le tse omisitsoeng ka serame (Setšoantšo sa S2). Sena se ka bakoa ke likaroloana tse kholo tse sa emeng hantle ka metsing. Liphetho tsohle tse kaholimo li bontša hore mokhoa oa ho omisa ka spray o ka sireletsa li-nanoparticles tsa insulin ho tsoa metsi 'meleng le hore li-nanoparticles tse ngata tsa insulin li ka fumanoa ntle le li-fillers kapa li-cryoprotectants.
Ho bolokoa ha insulin ho lekiloe ka pH = 2.5 medium ka pepsin, trypsin, le α-chymotrypsin ho bonts'a bokhoni ba ho sireletsa ba NPs khahlanong le tšilo ea lijo ea enzymatic kamora ho felloa ke metsi 'meleng. Ho bolokoa ha insulin ea NPs tse se nang metsi ho bapisitsoe le ba NPs tse lokisitsoeng bocha, 'me insulin ea mahala e sebelisitsoe e le taolo e mpe. Phuputsong ena, insulin ea mahala e bontšitse ho felisoa ha insulin ka potlako nakong ea lihora tse 4 kalafong eohle e meraro ea enzymatic (Setšoantšo sa 5a-c). Ka lehlakoreng le leng, tlhahlobo ea ho tlosoa ha insulin ea NPs tse omisitsoeng ka mannitol le NPs tse fafalitsoeng ka mannitol kapa ntle le mannitol li bontšitse tšireletso e phahameng haholo ea NPs tsena khahlanong le tšilo ea lijo ea enzymatic, e neng e tšoana le ea NPs tse lokisitsoeng bocha tsa insulin (setšoantšo sa 1).5a-c). Ka thuso ea li-nanoparticles ho pepsin, trypsin, le α-chymotrypsin, ho feta 50%, 60%, le 75% ea insulin e ka sireletsoa nakong ea lihora tse 4, ka ho latellana (Setšoantšo sa 5a-c). Bokhoni bona ba ho sireletsa insulin bo ka eketsa monyetla oa ho ba le insulin e ngata. ho monyela maling25. Liphetho tsena li bontša hore ho omisa ka spray ka kapa ntle le mannitol le ho omisa ka serame ka mannitol ho ka boloka bokhoni ba ho sireletsa insulin ba NPs kamora ho felloa ke metsi.
Tšireletso le boits'oaro ba ho lokolla insulin NPs e se nang metsi: (a) ts'ireletso ea insulin ka har'a tharollo ea pepsin; (b) ts'ireletso ea insulin ka har'a tharollo ea trypsin; (c) ts'ireletso ea insulin ka tharollo ea α-chymotrypsin; (d) Boits'oaro ba ho lokolla insulins e se nang metsi ka har'a tharollo ea pH = 2.5; (e) boits'oaro ba ho lokolla insulins e se nang metsi ka har'a tharollo ea pH = 6.6; (f) boits'oaro ba ho lokolla insulins e se nang metsi ka har'a tharollo ea pH = 7.0.
Li-NP tsa insulin tse omileng tse sa tsoa lokisoa le tse entsoeng bocha li ile tsa kenngoa ka har'a li-buffer tse fapaneng (pH = 2.5, 6.6, 7.0) mochesong oa 37 °C, li etsisa tikoloho ea pH ea mpa, duodenum le mala a manyane a kaholimo, ho hlahloba phello ea insulin ho hanyetsaneng ha insulin. Boitšoaro ba ho lokolla libakeng tse fapaneng. Karolo ea tsela ea mala. Ho pH = 2.5, li-NP tse nang le insulin le li-NP tse omisitsoeng tse qhibilihang hape li bontšitse ho lokolloa ha pele ka har'a hora ea pele, ho lateloa ke ho lokolloa butle nakong ea lihora tse 5 tse latelang (Setšoantšo sa 5d). Ho lokolloa hona ho potlakileng qalong ho ka etsahala hore ebe ke phello ea ho tlosoa ka potlako ha limolek'hule tsa protheine tse sa keneng ka botlalo sebopehong sa ka hare sa karoloana. Ho pH = 6.5, li-NP tse nang le insulin le li-NP tse omisitsoeng tse tsosolositsoeng li bontšitse ho lokolloa ho boreleli le butle nakong ea lihora tse 6, kaha pH ea tharollo ea teko e ne e tšoana le ea tharollo e lokiselitsoeng ke NPs (Setšoantšo sa 5e). Ho pH = 7, li-NP li ne li sa tsitsa 'me li batla li bola ka ho feletseng nakong ea lihora tse peli tsa pele (Setšoantšo sa 5f). Sena se bakoa ke hore ho tlosoa ha chitosan ho etsahala ho pH e phahameng, e leng se fellang ka marang-rang a polymer a sa kopaneng haholo le ho lokolloa ha insulin e nang le insulin.
Ho feta moo, di-insulin NP tse omisitsweng ka spray ntle le mannitol di bontshitse profil ya tokollo e potlakileng ho feta di-NP tse ding tse omeletseng (Setshwantsho sa 5d–f). Jwalo ka ha ho hlalositswe pele, di-insulin NP tse omisitsweng hape ntle le mannitol di bontshitse boholo bo bonyenyane ba dikarolwana. Dikarolwana tse nyane di fana ka sebaka se seholo, kahoo boholo ba moriana o amehang bo tla ba hodima bokahodimo ba dikarolwana kapa haufi le bona, e leng se fellang ka ho lokollwa ha moriana ka potlako26.
Ho ba le chefo ea lisele tsa NP ho ile ha hlahlojoa ka tlhahlobo ea MTT. Joalokaha ho bontšitsoe ho Setšoantšo sa S4, li-NP tsohle tse se nang metsi li fumanoe li se na tšusumetso e kholo bophelong ba sele maemong a 50-500 μg/ml, e leng se bontšang hore li-NP tsohle tse se nang metsi li ka sebelisoa ka mokhoa o sireletsehileng ho fihlela fensetereng ea phekolo.
Sebete ke setho se seholo seo insulin e sebelisang mesebetsi ea sona ea 'mele ka sona. Lisele tsa HepG2 ke sele ea hepatoma ea motho e sebelisoang hangata e le mohlala oa ho nka hepatocyte ka har'a vitro. Mona, lisele tsa HepG2 li sebelisitsoe ho lekola ho nkuoa ha li-NP tse se nang metsi ka lisele ho sebelisoa mekhoa ea ho omisa ka ho hatsetsa le ho fafatsa. Ho nkuoa ha lisele ka ho skena ka laser ea confocal ho sebelisoa cytometry ea phallo le pono kamora lihora tse 'maloa tsa ho kenngoa ka insulin ea mahala ea FITC ka bongata ba 25 μg/mL, li-NP tse sa tsoa lokisoa tsa FITC tse nang le insulin le li-NP tse se nang metsi tsa FITC tse nang le insulin ka bongata bo lekanang ba insulin Ho ile ha etsoa liteko tsa Quantitative microscopy (CLSM). Li-NP tse nang le Lyophilized ntle le mannitol li ile tsa senngoa nakong ea ho felloa ke metsi 'me ha lia ka tsa hlahlojoa tekong ena. Matla a fluorescence a ka hare ho sele a li-NP tse sa tsoa lokisoa tse nang le insulin, li-NP tse nang le lyophilized tse nang le mannitol, le li-NP tse omisitsoeng tse nang le mannitol le tse se nang mannitol (Setšoantšo sa 6a) e ne e le 4.3, 2.6, 2.4, le Ho feta tse lokolohileng ka makhetlo a 4.1. Sehlopha sa insulin sa FITC, ka ho latellana (Setšoantšo sa 6b). Liphetho tsena li bontša hore insulin e kentsoeng ka har'a capsule e matla haholo ho monyeng oa sele ho feta insulin e lokolohileng, haholo-holo ka lebaka la boholo bo bonyenyane ba li-nanoparticles tse nang le insulin tse hlahisitsoeng thutong.
Ho monngoa ha lisele tsa HepG2 kamora lihora tse 4 tsa ho kenngoa ka li-NP tse lokisitsoeng tse sa tsoa lokisoa le li-NP tse se nang metsi: (a) Kabo ea ho monngoa ha insulin ea FITC ke lisele tsa HepG2.(b) Karolelano ea geometri ea matla a fluorescence e hlahlojoang ke flow cytometry (n = 3), *P < 0.05 ha e bapisoa le insulin e lokolohileng.
Ka ho tšoanang, litšoantšo tsa CLSM li bontšitse hore matla a FITC fluorescence a li-NP tse sa tsoa lokisoa tsa FITC-insulin-loaded le li-NP tse omisitsoeng ka spray-loaded tsa FITC-insulin (ntle le mannitol) li ne li le matla haholo ho feta tsa lisampole tse ling (Setšoantšo sa 6a). Ho feta moo, ka ho eketsoa ha mannitol, viscosity e phahameng ea tharollo e ekelitse khanyetso ea ho monngoa ha sele, e leng se ileng sa fella ka ho fokotseha ha ho ata ha insulin. Liphetho tsena li bontša hore li-NP tse omisitsoeng ka spray-free mannitol li bontšitse bokhoni bo phahameng ka ho fetisisa ba ho monngoa ha sele hobane boholo ba tsona ba likaroloana bo ne bo le bonyenyane ho feta ba li-NP tse omisitsoeng ka ho hatsetsoa ka mor'a ho qhibiliha hape.
Chitosan (boima ba limolek'hule bo tloaelehileng ba 100 KDa, 75–85% deacetylated) e rekiloe ho Sigma-Aldrich. (Oakville, Ontario, Canada). Sodium tripolyphosphate (TPP) e rekiloe ho VWR (Radnor, Pennsylvania, USA). Insulin ea motho e kopantsoeng hape e sebelisitsoeng thutong ena e ne e tsoa ho Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). Insulin ea motho e nang le label ea Fluorescein isothiocyanate (FITC) le 4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) li rekiloe ho Sigma-Aldrich. (Oakville, Ontario, Canada). Mohala oa sele oa HepG2 o fumanoe ho ATCC (Manassas, Virginia, USA). Li-reagent tse ling kaofela e ne e le tsa tlhahlobo kapa tsa chromatographic.
Lokisetsa tharollo ea 1 mg/ml ea CS ka ho e qhala ka metsing a double distilled (metsi a DD) a nang le 0.1% acetic acid. Lokisetsa litharollo tsa 1 mg/ml tsa TPP le insulin ka ho li qhala ka metsing a DD le 0.1% acetic acid, ka ho latellana. Pre-emulsion e lokisitsoe ka polytron PCU-2-110 high speed homogenizer (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA). Ts'ebetso ea ho lokisa e tjena: pele, 2ml ea tharollo ea TPP e eketsoa ho 4ml ea tharollo ea insulin, 'me motsoako o hlohlelletsoa metsotso e 30 'me o tsoakoa ka botlalo. Ebe, tharollo e tsoakiloeng e eketsoa ka lehlakoreng le leng ho tharollo ea CS ka syringe tlas'a ho hlohlelletsa ka lebelo le phahameng (10,000 rpm). Metsoako e ne e bolokiloe tlas'a ho hlohlelletsa ka lebelo le phahameng (15,000 rpm) ka bateng ea leqhoa metsotso e 30, 'me e ile ea fetoloa ho pH e itseng ho fumana cross-linked insulin NPs. Ho homogenize le ho fokotsa boholo ba likaroloana tsa insulin NPs, li ile tsa etsoa sonicated bakeng sa e eketsehileng. Metsotso e 30 ka bateng ea leqhoa u sebelisa sonicator ea mofuta oa probe (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Jeremane).
Insulin NPS e ile ea lekoa bakeng sa bophara ba Z-average, polydispersity index (PDI) le zeta potential ho sebelisoa litekanyo tsa dynamic light scattering (DLS) ho sebelisoa Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, Austria) ka ho li hlapolla ka metsing a DD ho 25°C. Sebopeho le kabo ea boholo li ile tsa khetholloa ka microscope ea Hitachi H7600 transmission electron (TEM) (Hitachi, Tokyo, Japane), 'me litšoantšo hamorao tsa hlahlojoa ho sebelisoa software ea Hitachi imaging (Hitachi, Tokyo, Japane). Ho lekola katleho ea encapsulation (EE) le bokhoni ba ho kenya (LC) ba insulin NPs, li-NP li ile tsa kenngoa ka har'a li-tubes tsa ultrafiltration tse nang le khaotso ea boima ba limolek'hule ea 100 kDa 'me tsa kenngoa ka centrifuge ho 500 xg ka metsotso e 30. Insulin e sa kenngoang ka har'a filtrate e ile ea lekanngoa ho sebelisoa sistimi ea Agilent 1100 Series HPLC (Agilent, Santa Clara, California, USA) e nang le pompo ea quaternary, autosampler, kholomo. hitara, le detector ea DAD. Insulin e hlahlobiloe ka kholomo ea C18 (Zorbax, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, Agilent, USA) 'me ea fumanoa ho 214 nm. Mokhahlelo oa ho tsamaea e ne e le acetonitrile le metsi, a nang le 0.1% TFA, li-gradient ratios ho tloha ho 10/90 ho isa ho 100/0, 'me a sebetsa metsotso e 10. Mokhahlelo oa ho tsamaea o ile oa pompeloa ka sekhahla sa phallo sa 1.0 ml/min. Mocheso oa kholomo o ile oa beoa ho 20 °C. Bala liphesente tsa EE le LC u sebelisa li-equation.(1) le Eq.(2).
Litekanyo tse fapaneng tsa CS/insulin tse tlohang ho 2.0 ho isa ho 4.0 li ile tsa lekoa ho ntlafatsa insulin NP. Litekanyo tse fapaneng tsa tharollo ea CS li ile tsa eketsoa nakong ea ho lokisoa, ha motsoako oa insulin/TPP o ne o lula o tsitsitse. Li-Insulin NP li ile tsa lokisoa ka har'a pH ea 4.0 ho isa ho 6.5 ka ho laola ka hloko pH ea motsoako ka mor'a ho eketsa litharollo tsohle (insulin, TPP le CS). Boholo ba EE le likaroloana tsa nanoparticles tsa insulin li ile tsa hlahlojoa ka boleng bo fapaneng ba pH le litekanyo tsa boima ba CS/insulin ho ntlafatsa sebopeho sa li-insulin NP.
Li-insulin NP tse ntlafalitsoeng li ile tsa beoa holim'a setshelo sa aluminium 'me tsa koaheloa ka lisele tse tiisitsoeng ka theipi e itseng. Ka mor'a moo, lijana tse nang le li-screw li ile tsa beoa ka har'a sehatsetsi sa ho omisa sa Labconco FreeZone (Labconco, Kansas City, MO, USA) se nang le sehatsetsi sa terei. Mocheso le khatello ea vacuum li ile tsa beoa ho -10 °C, 0.350 Torr bakeng sa lihora tse 2 tsa pele, le 0 °C le 0.120 Torr bakeng sa lihora tse 22 tse setseng tsa lihora tse 24 ho fumana li-insulin NP tse omileng.
Sesepa sa ho omisa sa Buchi Mini Spray B-290 (BÜCHI, Flawil, Switzerland) se sebediseditswe ho hlahisa insulin e kentsweng ka hare. Diparamitha tse kgethilweng tsa ho omisa e ne e le: mocheso wa 100 °C, phallo ya dijo 3 L/min, le phallo ya kgase 4 L/min.
Li-Insulin NPs pele le ka mor'a ho felloa ke metsi li ile tsa hlalosoa ka ho sebelisa spectroscopy ea FTIR-ATR. Li-nanoparticles tse se nang metsi hammoho le insulin e sa lefelloeng le chitosan li ile tsa hlahlojoa ho sebelisoa spectrophotometer ea Spectrum 100 FTIR (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA) e nang le sesebelisoa sa ho etsa sampole sa ATR sa bokahohleng (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA). Lipalo-palo tsa matšoao li fumanoe ho tsoa ho li-scan tse 16 ka qeto ea 4 cm2 ka har'a maqhubu a 4000-600 cm2.
Sebopeho sa li-NP tsa insulin tse omileng se hlahlobiloe ke litšoantšo tsa SEM tsa li-NP tsa insulin tse omisitsoeng ka ho hatsetsoa le tse omisitsoeng ka spray tse nkiloeng ke Helios NanoLab 650 Focused Ion Beam-Scanning Electron Microscope (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, USA). Paramethara e ka sehloohong e sebelisitsoeng e ne e le voltage ea 5 keV le current ea 30 mA.
Li-NP tsohle tsa insulin tse se nang metsi li ile tsa qhibilihisoa hape ka metsing a dd. Boholo ba likaroloana, PDI, EE le LC li ile tsa lekoa hape ho sebelisoa mokhoa o tšoanang o boletsoeng pejana ho lekola boleng ba tsona kamora ho felloa ke metsi. Botsitso ba li-NP tsa anhydroinsulin le bona bo ile ba lekoa ka ho lekola litšobotsi tsa li-NP kamora ho bolokoa nako e telele. Phuputsong ena, li-NP tsohle kamora ho felloa ke metsi li ile tsa bolokoa ka sehatsetsing ka likhoeli tse tharo. Kamora likhoeli tse tharo tsa polokelo, li-NP li ile tsa lekoa bakeng sa boholo ba likaroloana tsa sebopeho, PDI, EE le LC.
Qhibilihisa 5 mL ea li-NP tse tsosolositsoeng ka har'a 45 mL e nang le mokelikeli oa mpa o etsisitsoeng (pH 1.2, e nang le 1% pepsin), mokelikeli oa mala (pH 6.8, e nang le 1% trypsin) kapa tharollo ea chymotrypsin (100 g/mL, ka har'a phosphate buffer, pH 7.8) ho lekola katleho ea insulin ho sireletseng li-NP kamora ho felloa ke metsi 'meleng. Li ile tsa beoa ka har'a 37°C ka lebelo la ho sisinyeha la 100 rpm. 500 μL ea tharollo e ile ea bokelloa ka linako tse fapaneng 'me mahloriso a insulin a ile a khethoa ke HPLC.
Boitšoaro ba ho lokolloa ha insulin NPs tse sa tsoa lokisoa le tse se nang metsi ka hare ho 'mele bo lekiloe ka mokhoa oa mokotla oa dialysis (khaotso ea boima ba limolek'hule ea 100 kDa, Spectra Por Inc.). Li-NPs tse omileng tse lokisitsoeng le tse tsosolositsoeng li ile tsa tšolloa ka har'a metsi a pH 2.5, pH 6.6, le pH 7.0 (0.1 M phosphate-buffered saline, PBS) ho etsisa tikoloho ea pH ea mpa, duodenum le mala a manyane a ka holimo, ka ho latellana. Lisampole tsohle li ile tsa kenngoa ka har'a 37 °C ka ho sisinyeha ho tsoelang pele ka 200 rpm. Hlatsoa mokelikeli ka ntle ho mokotla oa dialysis oa 5 mL ka linako tse latelang: 0.5, 1, 2, 3, 4, le 6 lihora, 'me u tlatse molumo hang-hang ka dialysate e ncha. Tšilafalo ea insulin mokelikeling e ile ea hlahlojoa ke HPLC, 'me sekhahla sa ho lokolloa ha insulin ho tsoa ho li-nanoparticles se ile sa baloa ho tloha karolelanong ea insulin e lokolohileng e lokollotsoeng ho insulin eohle e kentsoeng ka har'a li-nanoparticles (Equation 3).
Lisele tsa HepG2 tsa hepatocellular carcinoma tsa batho li holisitsoe ka lijana tsa bophara ba 60 mm ho sebelisoa Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) e nang le 10% ea fetal bovine serum, 100 IU/mL penicillin, le 100 μg/mL streptomycin29. Limela li ile tsa bolokoa ho 37°C, 95% mongobo o amanang, le 5% CO2. Bakeng sa liteko tsa ho monya, lisele tsa HepG2 li ile tsa jaloa liseleng tse 1 × 105/ml tsamaisong ea li-slide tsa chamber ea Nunc Lab-Tek tse 8 (Thermo Fisher, NY, USA). Bakeng sa liteko tsa cytotoxicity, li ile tsa jaloa lipoleiting tse 96 tsa liliba (Corning, NY, USA) ka bongata ba lisele tse 5 × 104/ml.
Teko ea MTT e sebelisitsoe ho lekola chefo ea insulin NPs30 e sa tsoa lokisoa le e se nang metsi. Lisele tsa HepG2 li ile tsa jaloa ka har'a lipoleiti tse 96 tsa liliba ka bongata ba lisele tse 5 × 104/mL 'me tsa lengoa matsatsi a 7 pele ho teko. Li-insulin NPs li ile tsa tšeloa ka bongata bo fapaneng (50 ho isa ho 500 μg/mL) ka har'a mokhoa oa ho lema 'me tsa fuoa lisele. Kamora lihora tse 24 tsa ho lema, lisele li ile tsa hlatsuoa ka makhetlo a 3 ka PBS 'me tsa kenngoa ka mokhoa oa ho lema o nang le 0.5 mg/ml MTT ka lihora tse ling tse 4. Chefo ea cytotoxicity e ile ea hlahlojoa ka ho lekanya phokotso ea enzymatic ea tetrazolium MTT e mosehla ho ea ho pherese formazan ka 570 nm ho sebelisoa Tecan infinite M200 pro spectrophotometer plate reader (Tecan, Männedorf, Switzerland).
Bokgoni ba ho monya ha NPs ka sele bo lekilwe ka microscopy ya confocal laser scanning le tlhahlobo ya cytometry ya phallo. Sediba se seng le se seng sa sistimi ya Nunc Lab-Tek chamber slide se ile sa phekolwa ka FITC-insulin ya mahala, FITC-insulin-loaded NPs, mme sa boela sa lokisa 25 μg/mL ya FITC-insulin NPs tse omileng ka tekanyo e tshwanang mme tsa futhumatswa ka dihora tse 4. Disele di ile tsa hlatsuwa ka makgetlo a 3 ka PBS mme tsa lokiswa ka 4% paraformaldehyde. Nuclei e ile ya silafatswa ka 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Sebaka sa insulin se ile sa bonwa ho sebediswa Olympus FV1000 laser scanning/two-photon confocal microscope (Olympus, Shinjuku City, Tokyo, Japane). Bakeng sa tlhahlobo ya cytometry ya phallo, mahloriso a tshwanang a 10 μg/mL free FITC-insulin, FITC-insulin-loaded NPs, le FITC-insulin e omileng e qhibilihisitsweng hape. Li-NP li ile tsa eketsoa lipoleiting tse 96 tse nang le li-hepG2 tse jetsoeng 'me tsa beoa ka har'a li-incubator lihora tse 4. Kamora lihora tse 4 tsa ho beoa, lisele li ile tsa tlosoa 'me tsa hlatsuoa ka makhetlo a 3 ka FBS. Lisele tse 5 × 104 ka sampole li ile tsa hlahlojoa ke cytometer ea phallo ea BD LSR II (BD, Franklin Lakes, New Jersey, United States).
Litekanyetso tsohle li hlahisoa e le karolelano ea ± ho kheloha ho tloaelehileng. Lipapiso lipakeng tsa lihlopha tsohle li ile tsa hlahlojoa ho sebelisoa ANOVA ea tsela e le 'ngoe kapa teko ea t ke IBM SPSS Statistics 26 bakeng sa Mac (IBM, Endicott, New York, USA) 'me p < 0.05 e ne e nkoa e le ea bohlokoa ka lipalo-palo.
Phuputso ena e bonts'a ho tenyetseha le bokhoni ba ho omisa ka spray ho ntsha metsi ho tswa ho chitosan/TPP/insulin nanoparticles tse hokahaneng ka cross-linked ka ho tsosolosa ho betere ha ho bapisoa le mekhoa e tloaelehileng ea ho omisa ka ho hatsetsa ho sebelisa li-bulking agents kapa cryoprotectants bokgoni le bokgoni bo phahameng ba mojaro. Li-nanoparticles tsa insulin tse ntlafalitsoeng li hlahisitse boholo ba karolelano ea likaroloana tsa 318 nm le katleho ea encapsulation ea 99.4%. Liphetho tsa SEM le FTIR kamora ho felloa ke metsi li bontšitse hore sebopeho sa selika-likoe se ne se bolokiloe feela ho li-NP tse omisitsoeng ka spray tse nang le le ntle le mannitol le lyophilized ka mannitol, empa li-NP tse lyophilized ntle le mannitol li ile tsa bola nakong ea ho felloa ke metsi. Tekong ea bokhoni ba ho tsosolosa, li-nanoparticles tsa insulin tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol li bontšitse boholo bo bonyenyane ba karolelano ea likaroloana le mojaro o phahameng ka ho fetisisa ha ho hlophisoa bocha. Boitšoaro ba ho lokolla li-NP tsena tsohle tse omisitsoeng bo bontšitse hore li lokollotsoe ka potlako litharollong tsa pH = 2.5 le pH = 7, 'me li tsitsitse haholo tharollong ea pH = 6.5. Ha li bapisoa le li-NP tse ling tse omisitsoeng hape tse qhibilihisitsoeng, li-NP li omisitsoe ka spray ntle le mannitol e bontšitse tokollo e potlakileng ka ho fetisisa. Sephetho sena se tsamaellana le se bonoang tekong ea ho monya lisele, kaha li-NP tse omisitsoeng ka spray ntle le mannitol li batla li bolokile katleho ea ho monya lisele tsa NP tse sa tsoa lokisoa. Liphetho tsena li bontša hore li-nanoparticles tsa insulin tse omileng tse lokisitsoeng ke ho omisa spray ntle le mannitol li loketse haholo bakeng sa ts'ebetso e tsoelang pele ho mefuta e meng ea tekanyo e sa keneleng metsi, joalo ka matlapa a molomo kapa lifilimi tsa bioadhesive.
Ka lebaka la mathata a thepa ea kelello, li-datasete tse hlahisitsoeng le/kapa tse hlahlobiloeng nakong ea phuputso ea hona joale ha li fumanehe phatlalatsa, empa li fumaneha ho bangoli ba amehang ha ho kopuoa ka nepo.
Kagan, A. Lefu la tsoekere la Mofuta oa 2: tšimoloho ea sechaba le ea saense, mathata a bongaka, le litlamorao ho bakuli le ba bang. (McFarlane, 2009).
Singh, AP, Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. Nts'etsopele ea insulin encapsulation: na ho nooa hona joale hoa khoneha? J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Tsoelo-pele ea morao tjena litsamaisong tsa ho fana ka liposome tse nang le insulin e ngata bakeng sa kalafo ea lefu la tsoekere.Interpretation.J. Pharmacy.549, 201–217 (2018).